說一說T100基因擴增儀由哪三個基本反應步驟構成

更新時間：2021-06-25

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　　T100基因擴增儀實際就是一個溫控設備，能在95℃，55℃，72℃之間很好地進行溫度控製。

　　本質是體外核酸擴增，加熱使雙鏈DNA解開螺旋，在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交，在TaqDNA聚合酶，dNTPs，Mg2+和合適pH緩衝液存在條件下延伸引物，重複“變性→退火→引物延伸”過程至25～40個循環，呈指數級擴大待測樣本中的核酸拷貝數。

　　擴增時加入的引物利用熒光素進行標記，使引物和熒光探針同時與模板進行特異性結合，擴增結果通過熒光信號采集係統實時采集信號並輸送到計算機分析處理係統，實時輸出量化結果，這樣的PCR儀叫實時熒光定量PCR儀。

　　T100基因擴增儀的操作非常簡便，接通電源，儀器自檢，設置溫度程序或調出儲存的程序運行即可。

　　T100基因擴增儀技術的原理類似於DNA的天然複製過程，其特異性依賴於靶序列兩端互補的寡核苷酸引物，由變性-退火-延伸三個基本反應步驟構成。

　　1、模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93℃左右一定時間後，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備。

　　2、模板DNA與引物的退火：模板DNA經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈互補序列配對結合。

　　3、引物的延伸：DNA模板-引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留複製原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留複製鏈。

　　重複循環變性-退火-延伸三過程，就可獲得更多的“半保留複製鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一輪循環需2~4分鍾，如此反複進行，每一輪循環所產生的DNA均能成為下一輪循環的模板，每一輪循環都使兩條人工合成的引物間的DNA特異區拷貝數擴增1倍，PCR產物以2的指數形式迅速擴增，經過25~30輪循環後（2~3小時），理論上可使基因擴增109倍以上，實際上一般可達106~107倍。